1、由強到弱：一般先用90%的乙腈或甲醇－水或緩沖溶液進行試驗，可很快得到分離結果，然后根據出峰情況調整有機溶劑（乙腈或甲醇）的比例。

2、三倍規(guī)則：每減少10%的有機溶劑（乙腈或甲醇）的量，保留因子增加約3倍，此為三倍規(guī)則。調整時注意觀察各個峰的分離情況。

3、粗調轉微調：當分離達到一定程度時，應將有機溶劑（乙腈或甲醇）10%的改變量調整為5%，并據此規(guī)則逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。

凝膠制備液相色譜儀的進樣方式

1．隔膜進樣。用微量注射器將樣品注進專門設計的與色譜柱相連的進樣頭內，可把樣品直接送到柱頭填充床的中心，死體積幾乎即是零，可以獲得的柱效，且價格便宜，操縱方便。但不能在高壓下使用；此外隔膜輕易吸附樣品產生記憶效應，使進樣重復性只能達到1~2%；加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到，常規(guī)分析使用受到限制。  

2．停流進樣。可避免在高壓下進樣。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新啟動時往往會出現“鬼峰”；另一缺點是保存時間不準。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中，效果較好。  

3．閥進樣。一般HPLC分析常用六通進樣閥，其關鍵部件由圓形密封墊和固定底座組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在，柱效率低于隔膜進樣，但耐高壓，進樣量正確，重復性好，操縱方便。  

4．自動進樣。用于大量樣品的常規(guī)分析。  

早期使用隔膜和停流進樣器，裝在凝膠制備液相色譜儀進口處。現在大都使用六通進樣閥或自動進樣器。進樣裝置要求：密封性好，死體積小，重復性好，保證中心進樣，進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。